Multiplex One Step RT-qPCR Premix-UNG
Mã số: HCB5145A
Bộ thăm dò Multiplex One Step RT-qPCR (UDG Plus) là bộ PCR định lượng multiplex dựa trên RNA làm mẫu.Trong quá trình thí nghiệm, sao chép ngược và PCR định lượng được thực hiện trong cùng một ống, giúp đơn giản hóa thao tác thí nghiệm và giảm nguy cơ ô nhiễm.Trong bộ công cụ này, chuỗi cDNA đầu tiên được tổng hợp một cách hiệu quả nhờ enzyme sao chép ngược chịu nhiệt và được khuếch đại định lượng nhờ enzyme HotStart Tag DNA Polymerase.Bộ sản phẩm chủ yếu chứa bộ đệm MP được tối ưu hóa, hỗn hợp enzyme, v.v. Dung dịch đệm đã chứa Mg2+và dNTP.Ngoài ra, các yếu tố có thể ức chế hiệu quả quá trình khuếch đại PCR không đặc hiệu và cải thiện hiệu quả khuếch đại của nhiều phản ứng qPCR được thêm vào, điều này có thể đảm bảo hiệu quả khuếch đại và thực hiện nhiều phản ứng khuếch đại.Hệ thống dUTP/UDG đã được bổ sung để ngăn chặn hiệu quả nguy cơ ô nhiễm khí dung.
Các thành phần
1. Bộ đệm
2. Hỗn hợp enzym
Sự chỉ rõ
| Bắt đầu nóng | Khởi động nóng tích hợp |
| Phương pháp phát hiện | Phát hiện đầu dò mồi |
| phương pháp PCR | RT-qPCR một bước |
| Polymerase | Taq DNA polymerase |
| Loại mẫu | ADN |
Điều kiện bảo quản
Sản phẩm được vận chuyển cùng với đá khô và có thể bảo quản ở nhiệt độ -25~-15oC trong 1 năm.Nên tránh thường xuyênđóng băng-tan băng.Nên lưu riêng.
Hướng dẫn
1.Sự phản ứng lại Hệ thống
| Các thành phần | Khối lượng (μL) | Nồng độ cuối cùng |
| Bộ đệm 2 × MP | 12,5 | 1× |
| Hỗn hợp enzyme | 1 | - |
| Hỗn hợp mồi/thăm dò (2,5 μM) | 3 | 0,3μM |
| RNA mẫu | 1-10 | - |
| H2O tự do RNase | đến 25 | - |
Ghi chú:
Đảm bảo trộn đều trước khi sử dụng, tránh tạo bọt quá nhiều do rung lắc mạnh.
Một.Nồng độ mồi: Hỗn hợp mồi bao gồm cả mồi ghép, tùy theo tình huống, nồng độ mồi tối ưu có thể nằm trong khoảng từ 0,1 đến 1,0μM.
b.Nồng độ đầu dò: Hỗn hợp đầu dò bao gồm nhóm huỳnh quang ghi nhãn đầu dò ghép kênh, tùy thuộc vào tình huống, nồng độ đầu dò tối ưu có thể nằm trong khoảng 0,05 đến 0,5μM.
c.Pha loãng mẫu: qPCR có độ nhạy cao và nên pha loãng mẫu.Giá trị Ct kiểm soát phù hợp trong khoảng từ 20 đến 35.
d.Chuẩn bị hệ thống: Vui lòng chuẩn bị trên bàn làm việc siêu sạch, pipet và ống phản ứng không có cặn nuclease;nên sử dụng đầu súng có bộ phận lọc.Tránh ô nhiễm chéo và ô nhiễm khí dung.
2. Tối ưu hóa việc đạp xeGiao thức
| Xe đạp bước chân | Nhiệt độ. | Thời gian | Chu kỳ |
| Phiên mã ngược | 50oCMột | 20 phút | 1 |
| Biến tính ban đầu | 95oC | 5 phút | 1 |
| Phản ứng khuếch đại | 95oC | 15 giây |
40-45 |
| 60oC b | 30 giây c |
Ghi chú:
Một.Phiên âm ngược: Nhiệt độ có thể chọn 42°C hoặc 50°C.
b.Phản ứng khuếch đại: Nhiệt độ được điều chỉnh theo giá trị Tm của mồi được thiết kế.
c.Thu tín hiệu huỳnh quang: Vui lòng đặt quy trình thí nghiệm theo yêu cầu của hướng dẫn sử dụng thiết bị.
Ghi chú
Vui lòng mặc PPE cần thiết, chẳng hạn như áo khoác và găng tay trong phòng thí nghiệm, để đảm bảo sức khỏe và sự an toàn của bạn.
