2×Sensi Direct Premix-UNG (Đầu dò qPCR)
Mã số: HCB5151A
SensiDirect Premix-UNG (Probe qPCR) được thiết kế để thực hiện PCR trực tiếp từ các mẫu mà không cần tách chiết DNA hoặc chuẩn bị mẫu.Thuốc thử này bao gồm DNA polymerase khởi động nóng, uracil DNA glycosylase (UNG), chất ức chế RNase, MgCl2, dNTP (với dUTP thay vì dTTP) và chất ổn định cho PCR định lượng (qPCR).Thuốc thử này có khả năng chịu đựng chất ức chế cao, do đó nó có thể được áp dụng trực tiếp để phát hiện các mẫu như tăm bông họng, nước bọt, máu toàn phần chống đông máu, huyết tương và huyết thanh mà không cần chiết xuất DNA.Thuốc thử sử dụng chất đệm độc quyền cho qPCR với hỗn hợp enzyme DNA polymerase chống ức chế và enzyme UNG.Do đó, nó có thể thu được sự khuếch đại tốt các gen mục tiêu trong các mẫu có chứa chất ức chế và ức chế khuếch đại dương tính giả do dư lượng PCR và ô nhiễm khí dung.Thuốc thử này tương thích với hầu hết các thiết bị PCR định lượng huỳnh quang, chẳng hạn như Hệ thống sinh học ứng dụng, Eppendorf, Bio-Rad, Roche, v.v.
Các thành phần
1. Hỗn hợp 50×SensiDirect Enzyme/UNG
2. Bộ đệm trộn sẵn 2×SensiDirect (dUTP)
Điều kiện bảo quản
Tất cả các thành phần phải được giữ ở -20oC để lưu trữ lâu dài và 4oC trong tối đa 3 tháng.Vui lòng trộn kỹ sau khi rã đông và ly tâm trước khi sử dụng.Tránh đóng băng-tan băng thường xuyên.
Giao thức đi xe đạp
| Bước chân | Nhiệt độ | Thời gian | Xe đạp |
| tiêu hóa | 50oC | 2 phút | 1 |
| Kích hoạt polymerase | 95oC | 1-5 phút | 1 |
| Biến tính | 95oC | 10-20 giây | 40-50 |
| Ủ/Mở rộng | 56-64oC | 20-60 tuổi |
Hướng dẫn sử dụng pipet
| Thuốc thử | Khối lượng mỗi sự phản ứng lại | Khối lượng mỗi phản ứng | Nồng độ cuối cùng |
| Bộ đệm trộn sẵn 2×SensiDirect (dUTP) | 12,5µL | 25µL | 1× |
| Hỗn hợp 50×SensiDirect Enzyme/UNG | 0,5µL | 1µL | 1× |
| Hỗn hợp đầu dò mồi 25×1, 2 | 1µL | 2µL | 1× |
| Vật mẫu3, 4 | - | - | - |
| ddH2O | - | - | - |
| Tổng khối lượng | 25 µL | 50 µL | - |
1. Nồng độ cuối cùng của sơn lót thường là 0,2μM.Để có kết quả tốt hơn, nồng độ mồi có thể được tối ưu hóa trong khoảng 0,2-1μM.
2. Nói chung, nồng độ đầu dò có thể được tối ưu hóa trong khoảng 0,1-0,3μM.Nồng độ tối ưu của đầu dò có liên quan đến thiết bị khuếch đại PCR thời gian thực, loại đầu dò và loại chất đánh dấu huỳnh quang.Vui lòng tham khảo hướng dẫn sử dụng thiết bị hoặc các yêu cầu cụ thể của từng đầu dò huỳnh quang.
3. Các loại mẫu khác nhau sẽ chứa các loại, hàm lượng chất ức chế và số lượng bản sao của gen mục tiêu khác nhau.Khối lượng mẫu cần được xem xét theo điều kiện thực tế.Pha loãng mẫu bằng cách thêm nước không có nuclease hoặc đệm TE, nếu cần.
4. Khối lượng khuyến nghị của các mẫu khác nhau:
| Vật mẫu | Khối lượng cho một 50 μL sự phản ứng lại | Tối đa tỉ lệ |
| Máu toàn phần chống đông | 2,5 µL | 5% |
| Huyết tương | 15 µL | 30% |
| huyết thanh | 10 µL | 20% |
| Ngoáy họng | 10 µL | 20% |
| nước bọt | 10 µL | 20% |
Kiểm soát chất lượng
1. Phát hiện chức năng: độ nhạy, độ đặc hiệu và độ lặp lại của qPCR.
2. Không có hoạt động nuclease ngoại sinh: không gây ô nhiễm enternuclease và exonuclease ngoại sinh.
Ghi chú của sản phẩm
1. Sản phẩm này sử dụng một loại DNA polymerase khởi động nóng mới, có thể được kích hoạt sau 1-5 phút. Do bộ đệm phản ứng của nó đã được tối ưu hóa nên nó phù hợp hơn cho PCR định lượng huỳnh quang kép hoặc nhiều lần bằng phương pháp thăm dò.
2. Nếu giá trị Rn của quá trình khuếch đại PCR quá thấp hoặc quá trình khuếch đại rõ ràng bị ức chế, việc giảm lượng mẫu, tăng thể tích phản ứng hoặc pha loãng mẫu trước đó có thể cải thiện kết quả.
3. Việc thu thập máu, nước bọt, nước tiểu, phết họng, v.v. phải tuân theo các yêu cầu của tiêu chí lâm sàng và có thể sử dụng mẫu mới để ngăn chặn sự phân hủy axit nucleic.
4. Vì các bộ khuếch đại khác nhau có hiệu quả sử dụng đối với dUTP và độ nhạy đối với UNG khác nhau, nên thuốc thử phải được tối ưu hóa nếu độ nhạy phát hiện giảm khi sử dụng hệ thống UNG.Hãy liên hệ với chúng tôi để được hỗ trợ kỹ thuật nếu cần.
5. Để tránh khuếch đại các sản phẩm PCR chuyển tiếp giữa các phản ứng một bước, cần có khu vực thí nghiệm và pipet chuyên dụng để khuếch đại.Sử dụng găng tay và thay thường xuyên và không mở ống phản ứng sau khi khuếch đại PCR.
