Robustart Taq DNA Polymerase
Robustart Taq DNA Polymerase là DNA polymerase khởi đầu nóng.Sản phẩm này không chỉ có thể ức chế tốt hơn phản ứng không đặc hiệu do quá trình ủ không đặc hiệu của mồi hoặc tập hợp mồi trong quá trình chuẩn bị và khuếch đại hệ thống PCR.Do đó, nó có độ đặc hiệu tuyệt vời và hiệu quả hơn trong việc khuếch đại các mẫu có nồng độ thấp và phù hợp với phản ứng khuếch đại PCR đa kênh.Hơn nữa, sản phẩm này có khả năng ứng dụng rất tốt, có thể thu được kết quả khuếch đại ổn định trong các loại phản ứng PCR khác nhau.
Các thành phần
1.5 U/μL Robustart Taq DNA polymerase
2.10 × PCR Buffer II (không chứa Mg²+) (tùy chọn)
3.25 mM MgCl2(không bắt buộc)
* 10 × PCR Buffer II (không chứa Mg2+) không chứa dNTP và Mg2+, vui lòng thêm dNTPs và MgCl2khi chuẩn bị hệ thống phản ứng.
Ứng dụng được đề xuất
1.Khuếch đại nhanh.
2.Nhiều khuếch đại.
3.Khuếch đại trực tiếp máu, gạc và các mẫu khác.
4.Phát hiện các bệnh về đường hô hấp.
Điều kiện lưu trữ
-20°C để bảo quản lâu dài, nên trộn đều trước khi sử dụng, tránh đông-rã đông thường xuyên.
*Nếu kết tủa xảy ra sau khi làm lạnh thì đó là điều bình thường;nên cân bằng ở nhiệt độ phòng trước khi trộn và sử dụng.
Định nghĩa đơn vị
Một đơn vị hoạt động (U) được định nghĩa là lượng enzyme kết hợp 10nmol deoxyribonucleotide vào vật liệu không hòa tan trong axit ở 74°C trong 30 phút bằng cách sử dụng DNA tinh trùng cá hồi đã hoạt hóa làm mẫu/mồi.
Kiểm soát chất lượng
1.Độ tinh khiết điện di SDS-PAGE lớn hơn 98%.
2.Độ nhạy khuếch đại, kiểm soát hàng loạt, độ ổn định.
3.Không có hoạt động nuclease ngoại sinh, không có ô nhiễm endnuclease hoặc exonuclease ngoại sinh
Hướng dẫn
Thiết lập phản ứng
| Các thành phần | Âm lượng (μL) | Nồng độ cuối cùng |
| 10 × Bộ đệm PCR II (không chứa Mg²+)a | 5 | 1× |
| dNTP (10mM mỗi dNTP) | 1 | 200 M |
| 25 mM MgCl2 | 2-8 | 1-4 mM |
| Robustart Taq DNA Polymerase (5U/μL) | 0,25-0,5 | 1,25-2,5 U |
| Hỗn hợp sơn lót 25 ×b | 2 | 1× |
| Bản mẫu | - | ＜ 1 µg/phản ứng |
| ddH2O | Đến 50 | - |
Ghi chú:
1) a.Bộ đệm không chứa dNTP và Mg2+, vui lòng thêm dNTP và MgCl2khi chuẩn bị hệ thống phản ứng.
2) b.Nếu được sử dụng cho qPCR/qRT-PCR, nên thêm đầu dò huỳnh quang vào hệ thống phản ứng.Thông thường, nồng độ mồi cuối cùng là 0,2 µM sẽ cho kết quả tốt;nếu hiệu suất phản ứng kém, nồng độ mồi có thể được điều chỉnh trong khoảng 0,2-1 μM.Nồng độ đầu dò thường được tối ưu hóa trong khoảng 0,1-0,3 μM.Các thí nghiệm gradient nồng độ có thể được thực hiện để tìm ra sự kết hợp tốt nhất giữa mồi và đầu dò.
Giao thức đạp xe nhiệt
| PCR thường xuyênquá trình | |||
| Bước chân | Nhiệt độ | Thời gian | Chu kỳ |
| Tiền biến tính | 95oC | 1-5 phút | 1 |
| Biến tính | 95oC | 10-20 giây | 40-50 |
| Ủ/Mở rộng | 56-64oC | 20-60 giây | |
| PCR nhanhquá trình | |||
| Bước chân | Nhiệt độ | Thời gian | Chu kỳ |
| Tiền biến tính | 95oC | 30 giây | 1 |
| Biến tính | 95oC | 1-5 giây | 40-45 |
| Ủ/Mở rộng | 56-64oC | 5-20 giây | |
Ghi chú
1.Tốc độ khuếch đại của DNA polymerase nhanh không được nhỏ hơn 1 kb/10 giây.Tốc độ tăng và giảm nhiệt độ, chế độ kiểm soát nhiệt độ và hiệu suất dẫn nhiệt của các thiết bị PCR khác nhau rất khác nhau, do đó nên tối ưu hóa các điều kiện phản ứng tối ưu cho thiết bị PCR nhanh cụ thể.
2.Hệ thống có khả năng thích ứng cao, độ đặc hiệu và độ nhạy cao hơn.
3.Thích hợp để sử dụng làm thuốc thử phát hiện PCR có độ nhạy cao và có thể được sử dụng trong các phản ứng khuếch đại PCR đa kênh.
4.Hoạt tính polymerase 5′→3′, hoạt động exonuclease 5′→3′;không có hoạt động exonuclease 3′→5′;không có chức năng hiệu đính.
5.Thích hợp để thử nghiệm định tính và định lượng PCR và RT-PCR.
6.Đầu 3’ của sản phẩm PCR là A, có thể nhân bản trực tiếp vào vector T.
7.Phương pháp ba bước được khuyến nghị sử dụng cho các mồi có nhiệt độ gắn mồi thấp hoặc để khuếch đại các đoạn dài hơn 200 bp.
