Khởi động nóng Taq DNA Polymerase
Hot Start Taq DNA Polymerase (Sửa đổi kháng thể) là một DNA polymerase khởi động nóng có khả năng chịu nhiệt từ Thermus Aquas YT-1, có hoạt tính polymerase 5′→3′ và hoạt động Endonuclease nắp 5′.Taq DNA polymerase khởi động nóng là Taq DNA polymerase được biến đổi bởi các kháng thể Taq không bền nhiệt.Việc sửa đổi kháng thể làm tăng độ đặc hiệu, độ nhạy và hiệu suất của PCR.
Các thành phần
| Thành phần | HC1012A-01 | HC1012A-02 | HC1012A-03 | HC1012A-04 |
| Bộ đệm Taq 5×HC | 4 × 1mL | 4×10mL | 4×50mL | 5×400mL |
| Taq DNA Polymerase khởi đầu nóng (Kháng thể được sửa đổi) (5 U/μL) | 0,1mL | 1mL | 5mL | 10 × 5mL |
Các ứng dụng
10 mM Tris-HCl (pH 7,4 ở 25oC), 100 mM KCl, 0,1 mM EDTA, 1 mM dithiothreitol, 0,5% Tween20, 0,5% IGEPALCA-630 và 50% Glycerol.
Điều kiện lưu trữ
Vận chuyển dưới 0°C và bảo quản ở -25°C~-15°C.
Định nghĩa đơn vị
Một đơn vị được định nghĩa là lượng enzyme kết hợp 15nmol dNTP vào vật liệu không hòa tan trong axit trong 30 phút ở 75°C.
Kiểm soát chất lượng
1.EndHoạt động onuclease:Việc ủ 20 U enzyme với 4 μg pUC19 DNA trong 4 giờ ở 37oC dẫn đến sự phân hủy DNA không thể phát hiện được như được xác định bằng phương pháp điện di trên gel.
2.PCR Lambda 5 kb:25 Chu kỳ khuếch đại PCR 5 ng DNA Lambda với 1,25 đơn vị Taq DNA Polymerase với sự có mặt của 200 µM dNTP và 0,2 µM mồi sẽ tạo ra sản phẩm có kích thước 5 kb như mong đợi.
3.Hoạt động exonuclease:Việc ủ phản ứng 50 µl chứa tối thiểu 12,5 U Taq DNA Polymerase với 10nmol 5′-FAM oligonucleotide trong 30 phút ở 37°C sẽ không phát hiện được sự suy thoái.
4.Hoạt động RNase:Việc ủ 10 µL phản ứng chứa 20 U enzyme với 1µg bản phiên mã RNA trong 2 giờ ở 37°C dẫn đến không phát hiện được sự phân hủy RNA như được xác định bằng phương pháp điện di trên gel.
5.Bất hoạt nhiệt:KHÔNG.
Hệ thống phản ứng
| Các thành phần | Âm lượng |
| DNA mẫua | không bắt buộc |
| Sơn lót chuyển tiếp 10 μM | 0,5 µL |
| Sơn lót ngược 10 μM | 0,5 µL |
| Hỗn hợp dNTP (mỗi loại 10mM) | 0,5 µL |
| Bộ đệm Taq 5×HC | 5 µL |
| Taq DNA Polymeraseb(5U/μL) | 0,125 µL |
| Nước không chứa Nuclease | Lên đến 25 µL |
Ghi chú:
1) a.
| ADN | Số lượng |
| Bộ gen | 1 ng-1 g |
| Plasmid hoặc virus | 1 trang-1 trang |
2) b.Nồng độ tối ưu của Taq DNA Polymerase có thể dao động từ 5-50 đơn vị/mL (0,1-0,5 đơn vị/25 µL phản ứng) trong các ứng dụng chuyên biệt.
Giao thức đạp xe nhiệt
PCR
| Bước chân | Nhiệt độ(°C) | Thời gian | Chu kỳ |
| Biến tính ban đầua | 95oC | 1-3 phút | - |
| Biến tính | 95oC | 15-30 giây | Chu kỳ 30-35 |
| Ủb | 45-68oC | 15-60 giây | |
| Sự mở rộng | 68oC | 1kb/phút | |
| Gia hạn cuối cùng | 68oC | 5 phút | - |
Ghi chú:
1) Sự biến tính ban đầu trong 1 phút ở 95°C là đủ cho hầu hết các quá trình khuếch đại.Đối với các mẫu khó, nên biến tính lâu hơn từ 2-3 phút ở 95°C.Với PCR khuẩn lạc, nên biến tính ban đầu trong 5 phút ở 95°C.
2) Bước ủ thường là 15-60 giây.Nhiệt độ ủ dựa trên Tm của cặp mồi và thường là 45-68oC.
