DNase I (Rnase miễn phí)(5u/ul)
Mã số: HC4007A
DNase I (Deoxyribonuclease I) là một endodeoxyribonuclease có thể tiêu hóa DNA sợi đơn hoặc sợi đôi.Nó nhận biết và tách các liên kết phosphodiester để tạo ra monodeoxynucleotide hoặc oligodeoxynucleotide chuỗi đơn hoặc đôi với các nhóm photphat ở đầu 5' và hydroxyl ở đầu 3'.Hoạt động của DNase I phụ thuộc vào Ca2+và có thể được kích hoạt bởi các ion kim loại hóa trị hai như Mn2+và Zn2+.5 mM Ca2+bảo vệ enzyme khỏi bị thủy phân.Với sự có mặt của Mg2+, enzyme có thể ngẫu nhiên nhận biết và cắt bất kỳ vị trí nào trên bất kỳ chuỗi DNA nào.Với sự có mặt của Mn2+, các chuỗi DNA kép có thể được nhận biết và cắt đồng thời ở hầu hết cùng một vị trí để tạo thành các đoạn DNA đầu phẳng hoặc các đoạn DNA đầu dính có 1-2 nucleotide nhô ra.
Các thành phần
| Tên | 0,1KU | 1KU | 5 KU | 50 KU |
| DNase I, không có RNase | 20μL | 200μL | 1mL | 10mL |
| Bộ đệm 10×DNase I | 1mL | 1mL | 5 × 1mL | 5×10mL |
Điều kiện bảo quản
-25oC~-15oC để lưu trữ;Vận chuyển dưới túi nước đá.
Hướng dẫn
1. Chuẩn bị dung dịch phản ứng trong ống không chứa RNase theo tỷ lệ dưới đây:
| Thành phần | Âm lượng |
| ARN | X µg |
| Bộ đệm 10 × DNase I | 1μL |
| DNase I, không có RNase(5U/μL) | 1 U trên mỗi µg RNA① |
| ddH2O | Lên đến 10μL |
Lưu ý: ①Tính khối lượng DNase I cần bổ sung dựa trên lượng RNA.
2. 37oC trong 15 phút;
3. Thêm 0,5M EDTA vào nồng độ cuối cùng là 2,5mM ~ 5mM và đun nóng ở 65oC trong 10 phút để dừng phản ứng.Mẫu có thể được sử dụng trực tiếp cho phản ứng tiếp theo như phiên mã ngượccuộc thí nghiệm.
Định nghĩa đơn vị
Một đơn vị được định nghĩa là lượng enzyme có khả năng phân hủy hoàn toàn 1µg pBR322DNA trong 10 phút ở 37oC.
Kiểm soát chất lượng
RNase:5U DNase I với 1,6 µg MS2 RNA trong 4 giờ ở 37oC không gây ra sự phân hủy nhưxác định bằng điện di trên gel agarose.
Ghi chú
1. Vui lòng tự chuẩn bị 0,5MEDTA.
2. Sử dụng 1U DNase I cho mỗi µg RNA.Tuy nhiên, nếu RNA nhỏ hơn 1µg thì hãy sử dụng 1U DNase I.
3. Vui lòng đặt enzyme lên đá trong quá trình hoạt động.
