chất ức chế rnase
Chất ức chế RNase ở chuột là chất ức chế RNase ở chuột tái tổ hợp được biểu hiện và tinh chế từ E.coli.Nó liên kết với RNase A, B hoặc C theo tỷ lệ 1:1 thông qua liên kết không cộng hóa trị, do đó ức chế hoạt động của ba enzyme và bảo vệ RNA khỏi bị thoái hóa.Tuy nhiên, nó không hiệu quả đối với RNase 1, RNase T1, S1 Nuclease, RNase H hoặc RNase từ Aspergillus.Chất ức chế RNase ở chuột đã được thử nghiệm bằng RT-PCR, RT-qPCR và IVT mRNA và tương thích với nhiều loại enzyme phiên mã ngược, DNA polymerase và RNA polymerase thương mại khác nhau.
So với các chất ức chế RNase ở người, chất ức chế RNase ở chuột không chứa hai cystein rất nhạy cảm với quá trình oxy hóa gây bất hoạt chất ức chế.Điều đó làm cho nó ổn định ở nồng độ DTT thấp (dưới 1 mM).Tính năng này làm cho nó phù hợp để sử dụng trong các phản ứng có nồng độ DTT cao gây bất lợi cho phản ứng (ví dụ RT-PCR thời gian thực).
Asự ứng dụng
Sản phẩm này có thể được sử dụng rộng rãi trong bất kỳ thí nghiệm nào có thể can thiệp RNase để tránh sự phân hủy RNA, chẳng hạn như:
1.Tổng hợp chuỗi đầu tiên của cDNA, RT-PCR, RT-qPCR, v.v.
2.Bảo vệ RNA khỏi bị thoái hóa trong quá trình phiên mã/dịch mã in vitro (ví dụ: hệ thống sao chép virus in vitro).
3.Ức chế hoạt động RNase trong quá trình tách và tinh chế RNA.
Điều kiện bảo quản
Sản phẩm có thể được bảo quản ở nhiệt độ -25～- 15oC, có giá trị trong 2 năm.
Bộ đệm lưu trữ
50 mM KCl, 20 mM HEPES-KOH (pH 7,6, 25 oC), 8 mM DTT và 50% glycerol.
định nghĩa đơn vị
Lượng chất ức chế RNase ở chuột cần thiết để ức chế 50% hoạt động của 5ng ribonuclease A được xác định là một đơn vị (U).
Trọng lượng phân tử của protein
Trọng lượng phân tử của chất ức chế RNase ở chuột là 50 kDa.
Kiểm soát chất lượng
Exonuclease Hoạt động:
40 U chất ức chế RNase ở chuột với 1 μg λ -Hind III DNA tiêu hóa ở 37oC trong 16 giờ không mang lại sự phân hủy như được xác định bằng phương pháp điện di trên gel agarose.
Hoạt động của Endonuclease:
40 U chất ức chế RNase ở chuột với 1μ g λ DNA ở 37oC trong 16 giờ không mang lại sự phân hủy như được xác định bằng phương pháp điện di trên gel agarose.
biệt danh Hoạt động:
40U chất ức chế RNase ở chuột với 1μ g pBR322 ở 37oC trong 16 giờ không mang lại sự phân hủy như được xác định bằng phương pháp điện di trên gel agarose.
RNase Hoạt động:
40U chất ức chế RNase ở chuột với 1,6μ g MS2 RNA trong 4 giờ ở 37oC không mang lại sự phân hủy như được xác định bằng điện di trên gel agarose.
E.coli ADN:
40 U chất ức chế RNase ở chuột được sàng lọc sự hiện diện của DNA bộ gen của E. coli bằng cách sử dụng TaqMan qPCR với các đoạn mồi dành riêng cho locus E. coli 16S rRNA.Mức độ ô nhiễm DNA bộ gen của E. coli là ≤ 0,1 pg/40 U.
Notes
1. Dao động hoặc khuấy mạnh sẽ dẫn đến bất hoạt enzyme.
2. Phạm vi nhiệt độ tối ưu của chất ức chế này là 25-55oC và nó bị bất hoạt ở 65oC trở lên.
3. Hoạt động của RNase H, RNase 1 và RNase T1 không bị ức chế bởi chất ức chế RNase ở chuột.
4. Sự ức chế hoạt động RNase được tìm thấy ở phạm vi pH rộng (pH 5-9 đều hoạt động) và hoạt động cao nhất được quan sát thấy ở pH 7-8.
5. Vì ribonuclease thường duy trì hoạt động trong điều kiện biến tính nên phải cẩn thận để tránh làm biến tính các phân tử Chất ức chế RNase đã tạo phức với ribonuclease.Để ngăn chặn sự giải phóng ribonuclease hoạt động, nên tránh nhiệt độ lớn hơn 50°C và nồng độ urê cao hoặc các chất biến tính khác.
