Nhiệt độ nhạy cảm UNG
UNG nhạy cảm với nhiệt độ (TS-UNG) thu được bằng cách biểu hiện tái tổ hợp ở E. coli.Enzym này xúc tác giải phóng uracil tự do từ DNA chuỗi đơn và chuỗi kép chứa uracil và không có hoạt tính chống lại RNA.So với enzyme UNG thông thường có nguồn gốc gen E. coli, enzyme TS-UNG có hoạt tính cao hơn ở nhiệt độ thấp (20oC ~ 37oC), nhạy cảm với nhiệt độ và dễ bị bất hoạt (50oC), tránh sự suy giảm quá trình khuếch đại có chứa dUTP sản phẩm ở nhiệt độ phòng bằng hoạt tính còn sót lại có thể còn sót lại sau khi vô hoạt enzyme UNG thông thường.Vì vậy, enzyme TS-UNG không chỉ phù hợp cho phản ứng ngăn ngừa nhiễm bẩn PCR mà còn phù hợp tốt với chương trình khuếch đại RT-PCR và có thể sử dụng trong phản ứng ngăn ngừa nhiễm bẩn RT-PCR.
Ứng dụng được đề xuất
Khuếch đại ngăn ngừa ô nhiễm
Điều kiện lưu trữ
-20°C để bảo quản lâu dài, nên trộn đều trước khi sử dụng, tránh đông-rã đông thường xuyên.
Bộ đệm lưu trữ
20 mM Tris-HCl (pH 7,5), 100 mM NaCl, 0,1 mM EDTA, 1 mM DTT, Chất ổn định, 50% Glycerol.
Định nghĩa đơn vị
Lượng enzyme cần thiết để phân hủy 1µg DNA chuỗi đơn chứa bazơ dU trong 1 giờ ở 37°C là 1 đơn vị hoạt tính (U).
Kiểm soát chất lượng
1.Độ tinh khiết điện di SDS-PAGE lớn hơn 98%
2.Hoạt động phân hủy, kiểm soát từng đợt, độ ổn định
3.Không có hoạt động nuclease ngoại sinh, không có ô nhiễm endnuclease hoặc exonuclease ngoại sinh.
Hướng dẫn
| Các thành phần | Khối lượng (μL) | Nồng độ cuối cùng |
| Bộ đệm PCR 10 × (không chứa dNTP, Mg²+miễn phí) | 5 | 1× |
| dUTP (dCTP, dGTP, dATP) | - | 200 M |
| dUTP (thay thế dTTP) | - | 200-600 MM |
| 25 mM MgCl2 | 2-8 µL | 1-4 mM |
| 5 U/μL Taq | 0,25 | 1,25 U |
| 1 U/μLTS-UNG | 0,5 (0,1-0,5) | 0,5 U (0,1-0,5U) |
| Hỗn hợp sơn lót 25 ×Một | 2 | 1× |
| Bản mẫu | - | ＜1μg/phản ứng |
| ddH₂O | Đến 50 | - |
Lưu ý: a: Nếu được sử dụng cho qPCR/qRT-PCR, nên thêm đầu dò huỳnh quang vào hệ thống phản ứng.Thông thường, nồng độ mồi cuối cùng là 0,2 μM có thể cho kết quả tốt;khi hiệu suất phản ứng kém, nồng độ mồi có thể được điều chỉnh trong khoảng 0,2-1 μM.Thông thường, nồng độ đầu dò được tối ưu hóa trong khoảng 0,1-0,3 μM.Các thí nghiệm gradient nồng độ có thể được thực hiện để tìm ra sự kết hợp tốt nhất giữa mồi và đầu dò.
Ghi chú
1.Nhiệt độ phản ứng tối ưu của enzyme TS-UNG tương đối thấp và có thể tối ưu hóa trong khoảng 20oC ~ 37oC, liều lượng enzyme và thời gian phản ứng có thể được tối ưu hóa trong khoảng 0,1 ~ 0,5 U, 5 ~ 10 phút;và enzyme có thể bị bất hoạt trong quá trình sao chép ngược.
2.Nó phù hợp cho PCR và RT-PCR để ngăn ngừa ô nhiễm.
3.Tránh đóng băng-tan băng thường xuyên và không tiếp xúc với biến động nhiệt độ lớn.
4.Các gen được khuếch đại khác nhau có hiệu suất sử dụng dUTP và độ nhạy với enzyme UNG khác nhau, do đó, nếu việc sử dụng hệ thống UNG dẫn đến giảm độ nhạy phát hiện thì hệ thống phản ứng cần được điều chỉnh và tối ưu hóa, nếu bạn cần hỗ trợ kỹ thuật, vui lòng liên hệ Công ty của chúng tôi.
