Taq DNA Polymerase hoang dã
Taq DNA Polymerase là một DNA polymerase ổn định nhiệt từ Thermus Aquas YT-1, có hoạt tính polymerase 5′→3′ và hoạt động Endonuclease vạt 5′.
Các thành phần
| Thành phần | HC1010A-01 | HC1010A-02 | HC1010A-03 | HC1010A-04 |
| Bộ đệm Taq 10× | 2 × 1mL | 2×10mL | 2×50mL | 5×200mL |
| Taq DNA Polymerase (5 U/μL) | 0,1mL | 1mL | 5mL | 5×10mL |
Điều kiện lưu trữ
Vận chuyển dưới 0°C và bảo quản ở -25°C~-15°C.
Định nghĩa đơn vị
Một đơn vị được định nghĩa là lượng enzyme kết hợp 15nmol dNTP vào vật liệu không hòa tan trong axit trong 30 phút ở 75°C.
Kiểm soát chất lượng
1.Xét nghiệm độ tinh khiết protein (SDS-PAGE):Độ tinh khiết của Taq DNA polymerase được xác định ≥95% bằng phân tích SDS-PAGE.
2.EndHoạt động onuclease:Tối thiểu 5 U Taq DNA polymerase với 1 μg λDNA trong 16 giờ ở 37oC sẽ không dẫn đến sự suy giảm có thể phát hiện được như đã xác định.
3.Hoạt động exonuclease:Tối thiểu 5 U Taq DNA polymerase với 1 μg λ -Hind Ⅲ DNA tiêu hóa trong 16 giờ ở 37 oC dẫn đến không phát hiện được sự suy thoái như đã xác định.
4.Hoạt động của biệt danh:Tối thiểu 5 U Taq DNA polymerase với 1 μg pBR322 DNA trong 16 giờ ở 37°C sẽ không dẫn đến sự suy giảm có thể phát hiện được như đã xác định.
5.Hoạt động RNase:Tối thiểu 5 U Taq DNA polymerase với 1,6 μg MS2 RNA trong 16 giờ ở 37°C sẽ không dẫn đến sự suy giảm có thể phát hiện được như đã xác định.
6.E coliADN:5 U của Taq DNA polymerase được kiểm tra sự hiện diện của DNA bộ gen của E. coli bằng cách sử dụng TaqMan qPCR với các đoạn mồi dành riêng cho locus E. coli 16S rRNA.Mức độ ô nhiễm DNA bộ gen của E. coli là 1 Bản sao.
7.Khuếch đại PCR (DNA Lambda 5,0 kb)- Phản ứng 50 µL chứa 5 ng DNA Lambda với 5 đơn vị Taq DNA Polymerase trong 25 chu kỳ khuếch đại PCR cho kết quả sản phẩm dự kiến có kích thước 5,0 kb.
Thiết lập phản ứng
| Các thành phần | Âm lượng |
| DNA mẫua | không bắt buộc |
| Sơn lót chuyển tiếp 10 μM | 1 µL |
| Sơn lót ngược 10 μM | 1 µL |
| Hỗn hợp dNTP (mỗi loại 10mM) | 1 µL |
| Bộ đệm 10×Taq | 5 µL |
| Taq DNA Polymeraseb | 0,25 µL |
| Nước không chứa Nuclease | Lên đến 50 µL |
Ghi chú:
1) Nồng độ phản ứng tối ưu của các mẫu khác nhau là khác nhau.Bảng sau đây trình bày cách sử dụng mẫu khuyến nghị của hệ thống phản ứng 50 µL.
| ADN | Số lượng |
| Bộ gen | 1 ng-1 g |
| Plasmid hoặc virus | 1 trang-1 trang |
2) Nồng độ tối ưu của Taq DNA Polymerase có thể dao động từ 0,25 µL~1 µL trong các ứng dụng chuyên biệt.
Sự phản ứng lạiChương trình
| Bước chân | Nhiệt độ(°C) | Thời gian | Chu kỳ |
| Biến tính ban đầua | 95oC | 5 phút | - |
| Biến tính | 95oC | 15-30 giây | Chu kỳ 30-35 |
| Ủb | 60oC | 15 giây | |
| Sự mở rộng | 72oC | 1kb/phút | |
| Gia hạn cuối cùng | 72oC | 5 phút | - |
Ghi chú:
1) Điều kiện biến tính ban đầu phù hợp với hầu hết các phản ứng khuếch đại và có thể được sửa đổi theo độ phức tạp của cấu trúc mẫu.Nếu cấu trúc mẫu phức tạp, thời gian biến tính trước có thể được kéo dài đến 5 - 10 phút để cải thiện hiệu ứng biến tính ban đầu.
2) Nhiệt độ ủ cần được điều chỉnh theo giá trị Tm của sơn lót, thường được đặt ở mức thấp hơn 3 ~ 5oC so với giá trị Tm của sơn lót;Đối với các mẫu phức tạp, cần điều chỉnh nhiệt độ ủ và kéo dài thời gian kéo dài để đạt được hiệu quả khuếch đại.
