Superstart qPCR Premix plus-UNG
Mã số: HCB5071E
Superstart qPCR Premix plus-UNG là thuốc thử chuyên dụng được thiết kế cho các phản ứng định tính và định lượng PCR thời gian thực bằng cách sử dụng phương pháp phát hiện dựa trên đầu dò, được phát triển đặc biệt cho các quy trình đông khô.Nó chứa enzyme khởi động nóng mới Hotstart Taq plus (DG), có hoạt tính enzyme Taq được phong ấn ở nhiệt độ phòng, ức chế hiệu quả sự khuếch đại không đặc hiệu gây ra bởi quá trình ủ không đặc hiệu của mồi hoặc sự hình thành mờ của mồi trong điều kiện nhiệt độ thấp, do đó cải thiện tính đặc hiệu của phản ứng khuếch đại.Thuốc thử này sử dụng bộ đệm đặc hiệu qPCR được tối ưu hóa và hệ thống chống nhiễm bẩn UNG/dUTP để đạt được khả năng khởi động nóng nhanh, cải thiện đáng kể hiệu quả và độ nhạy của phản ứng qPCR.Nó có thể thu được các đường cong tiêu chuẩn tốt trong nhiều lĩnh vực định lượng và thực hiện định lượng một cách chính xác, ngăn chặn hiệu quả hiện tượng khuếch đại dương tính giả do các sản phẩm PCR dư hoặc ô nhiễm khí dung gây ra.Thuốc thử này tương thích với hầu hết các thiết bị PCR định lượng huỳnh quang của các nhà sản xuất như Ứng dụng Biosystems, Eppendorf, Bio-Rad và Roche, v.v., và có độ ổn định tốt ở dạng đông khô.
Thành phần thuốc thử
1. 5×HotstartPremix plus-UNG (Mg2+miễn phí) (DG)
2. 250 mM MgCl2
3. Chất bảo vệ 4×(tùy chọn)
Điều kiện bảo quản
Lưu trữ lâu dài ở -20oC;có thể được lưu trữ ở 4oC trong tối đa 3 tháng.Trộn đều trước khi sử dụng vàTránh đóng băng và tan băng lặp đi lặp lại.
Giao thức đi xe đạp
| Thủ tục | Nhiệt độ. | Thời gian | Xe đạp |
| tiêu hóa | 50oC | 2 phút | 1 |
| Kích hoạt polymerase | 95oC | 1 ~ 5 phút | 1 |
| Biến tính | 95oC | 10 ~ 20 giây | 40-50 |
| Ủ và mở rộng | 56 ~ 64oC | 20 ~ 60 giây | 40-50 |
qPCR Chất lỏng phản ứng SyChuẩn bị thân cây
|
Thành phần |
Thể tích 25µL |
Thể tích 50µL |
Nồng độ cuối cùng |
| 5×HotstartPremix plus-UNG(Mg2+miễn phí) (DG) | 5µL | 10µL | 1× |
| 250mM MgCl2 | 0,45µL | 0,9µL | 4,5 mM |
| chất bảo vệ 4×1 | 6,25µL | 12,5µL | 1× |
| Hỗn hợp đầu dò mồi 25×2 | 1µL | 2µL | 1× |
| DNA mẫu3 | —— | —— | —— |
| ddH2O | Đến 25µL | Đến 50µL | —— |
1. Nồng độ cuối cùng là 0,2μM đối với sơn lót thường mang lại kết quả tốt;khi hiệu suất phản ứng kém, điều chỉnh nồng độ mồi trong khoảng 0,2-1μM nếu cần.Nồng độ đầu dò thường được tối ưu hóa trong phạm vi 0,1-0,3μM thông qua các thử nghiệm độ dốc để tìm ra sự kết hợp tối ưu.
2. Số lượng bản sao của gen mục tiêu chứa trong các loại mẫu khác nhau là khác nhau;nếu cần, có thể thực hiện pha loãng gradient để xác định lượng bổ sung mẫu tối ưu.
3. Hệ thống này có thể được đông khô;Khi khách hàng sử dụng hệ thống này mà không có yêu cầu đông khô, có thể thêm chất bảo vệ 4 × lyoprotectant; nếu có yêu cầu về sản phẩm đông khô, trong quá trình xác nhận hiệu suất sản phẩm ở giai đoạn thuốc thử dạng lỏng, nó phải thêm chất bảo vệ 4 × lyoprotectant để đảm bảo tính nhất quán với các thành phần hệ thống đông khô và các hiệu ứng.
Khi hệ thống được sử dụngd để đông khô, hãy chuẩn bị hệ thống as tiếp theo:
| Thành phần | 25µL Hệ thống phản ứng |
| 5 ×HotstartPremix plus-UNG (Mg2+miễn phí) (DG) | 5µL |
| 250mM MgCl2 | 0,45µL |
| chất bảo vệ 4× | 6,25µL |
| Hỗn hợp đầu dò mồi 25× | 1µL |
| ddH2O | Đến 18~20µL |
* Nếu cần các hệ thống đông khô khác, vui lòng tham khảo ý kiến riêng.
Quá trình đông khôss
| Thủ tục | Nhiệt độ. | Thời gian | Tình trạng | Áp lực |
| Làm đông trước | 4oC | 30 phút | Giữ |
1 atm |
| -50oC | 60 phút | làm mát | ||
| -50oC | 180 phút | Giữ | ||
| Sấy sơ cấp | -30oC | 60 phút | Sưởi |
Chân không cuối cùng |
| -30oC | 70 phút | Giữ | ||
| Sấy thứ cấp | 25oC | 60 phút | Sưởi |
Chân không cuối cùng |
| 25oC | 300 phút | Giữ |
2. Quá trình đông khô ở trên chỉ mang tính chất tham khảo.Các loại sản phẩm khác nhau và các máy đông khô khác nhau có các thông số khác nhau nên có thể điều chỉnh theo thực tế.điều kiện trong quá trình sử dụng.
3. Các quy trình đông khô khác nhau có thể phù hợp với các cỡ lô đông khô khác nhausản phẩm, vì vậy phải thực hiện xác nhận thử nghiệm đầy đủ khi sử dụng cho sản xuất quy mô lớn.
Hướng dẫn sử dụng đông khôbột d
1. Ly tâm nhanh bột đông khô;
2. Thêm mẫu axit nucleic vào bột đông khô và thêm nước đến 25µL;
3. Trộn đều bằng cách ly tâm và chạy trên máy.
Kiểm soát chất lượng:
1. Kiểm tra chức năng: độ nhạy, độ đặc hiệu, độ tái lập của qPCR.
2. Không có hoạt động nuclease ngoại sinh, không nhiễm bẩn end/exonuclease ngoại sinh.
Thông tin kĩ thuật:
1. Superstart qPCR Premix plus-UNG sử dụng enzyme khởi động nóng mới cho phép khởi động nóng nhanh chóng trong vòng 1~5 phút;thông qua công thức đệm đặc biệt, nó phù hợp cho các phản ứng PCR định lượng huỳnh quang đa kênh.
2. Nó có độ đặc hiệu cao hơn giúp cải thiện đáng kể độ nhạy của phát hiện giới hạn PCR định lượng huỳnh quang, làm cho chuẩn hóa đường cong khuếch đại, giá trị huỳnh quang đạt được sự cải thiện rõ rệt ở các mẫu nồng độ thấp, thích hợp làm thuốc thử phát hiện PCR định lượng huỳnh quang có độ nhạy cao.
3. Đối với mồi có nhiệt độ ủ thấp hơn hoặc đoạn mồi dài hơn 200bp, nên sử dụng phương pháp 3 bước.
4. Hiệu suất sử dụng dUTP và độ nhạy với enzyme UNG khác nhau đối với các gen mục tiêu khác nhau, do đó, nếu việc sử dụng hệ thống UNG dẫn đến giảm độ nhạy phát hiện thì hệ thống phản ứng cần được điều chỉnh và tối ưu hóa.Nếu cần hỗ trợ kỹ thuật xin vui lòng liên hệ với công ty chúng tôi.
5. Sử dụng khu vực và pipet chuyên dụng trước và sau khi khuếch đại, đeo găng tay trong quá trình vận hành và thay thế thường xuyên;không mở ống phản ứng sau khi hoàn thành PCR để giảm thiểu ô nhiễm mẫu bởi sản phẩm PCR.
