tên A
Ribonuclease A (RNaseA) là một polypeptide chuỗi đơn chứa 4 liên kết disulfide có trọng lượng phân tử khoảng 13,7 kDa.RNase Ai là một endoribonuclease đặc biệt phân hủy RNA chuỗi đơn ở gốc C và U.Cụ thể, sự phân tách nhận biết liên kết phosphodiester được hình thành bởi đầu 5'-ribose của một nucleotide và nhóm photphat trên đầu 3'-ribose của nucleotide pyrimidine liền kề, do đó các photphat 2,3'-Cyclic bị thủy phân thành 3 tương ứng 'nucleoside photphat (ví dụ: pG-pG-pC-pA-pG bị RNase A phân cắt để tạo ra pG-pG-pCp và A-PG).RNase A hoạt động mạnh nhất trong việc cắt RNA chuỗi đơn.Nồng độ làm việc khuyến nghị là 1- 100 μ G/mL, tương thích với nhiều hệ thống phản ứng khác nhau.Nồng độ muối thấp (0-100 mM NaCl) có thể được sử dụng để cắt chuỗi RNA đơn, RNA chuỗi kép và chuỗi RNA được hình thành bằng cách lai RNA-DNA.
Tuy nhiên, ở nồng độ muối cao ( ≥0,3 M), RNase A chỉ phân cắt RNA chuỗi đơn một cách đặc hiệu.
RNase A được sử dụng phổ biến nhất để loại bỏ RNA trong quá trình chuẩn bị DNA plasmid hoặc DNA bộ gen.Việc DNase có hoạt động hay không trong quá trình chuẩn bị có thể dễ dàng ảnh hưởng đến phản ứng.Phương pháp đun sôi truyền thống trong nồi cách thủy có thể được sử dụng để làm bất hoạt hoạt động của DNase.Sản phẩm này không chứa DNase và protease và không cần xử lý nhiệt trước khi sử dụng.Ngoài ra, sản phẩm này cũng có thể được sử dụng trong các thí nghiệm sinh học phân tử như phân tích bảo vệ RNase và phân tích trình tự RNA.
Điều kiện bảo quản
Sản phẩm nên được bảo quản ở -25oC ~ - 15oC trong 2 năm.
Thông số kỹ thuật
| Vẻ bề ngoài | bột |
| Số lượng | 100mg / 1g |
| Loại sản phẩm | RNase A |
Hướng dẫn
Đây là một trong những phương pháp phổ biến để chuẩn bị dung dịch lưu trữ RNase A.Nó cũng có thể được chuẩn bịbằng các phương pháp khác theo phương pháp truyền thống trong phòng thí nghiệm hoặc tài liệu tham khảo (nhưhòa tan trực tiếp trong dung dịch Tris-HCl 10 mM, pH 7,5 hoặc Tris-NaCl)
1. Sử dụng 10 mM natri axetat (pH 5,2) để chuẩn bị dung dịch bảo quản RNase A 10 mg/mL.
2. Làm nóng ở 100oC trong 15 phút.
3. Làm nguội đến nhiệt độ phòng, thêm 1/10 thể tích 1 M Tris-HCl (pH 7,4), điều chỉnh độ pH của nó thành 7,4 (đối vớiví dụ: thêm 500 mL dung dịch bảo quản RNase 10 mg/mL Tris-HCl, pH7,4).
4. Đóng gói phụ ở -20oC để bảo quản đông lạnh, có thể ổn định lên đến 2 năm.
[Ghi chú]:
Khi đun sôi dung dịch RNaseA ở điều kiện trung tính sẽ hình thành kết tủa RNase;Đun sôi ở độ pH thấp hơn và nếu có kết tủa thì có thể quan sát được, nguyên nhân có thể là do sự hiện diện của tạp chất protein.Nếu tìm thấy cặn sau khi đun sôi, tạp chất có thể được loại bỏ bằng cách ly tâm tốc độ cao (13000 vòng/phút), sau đó được đóng gói lại để bảo quản đông lạnh.
Ghi chú
Vui lòng mặc PPE cần thiết, chẳng hạn như áo khoác và găng tay phòng thí nghiệm, để đảm bảo sức khỏe và sự an toàn của bạn.
