Chất ức chế Rnase (không chứa Glycerol)
Chất ức chế RNase ở chuột là chất ức chế RNase ở chuột tái tổ hợp được biểu hiện và tinh chế từ E.coli.Nó liên kết với RNase A, B hoặc C theo tỷ lệ 1:1 thông qua liên kết không cộng hóa trị, do đó ức chế hoạt động của ba enzyme và bảo vệ RNA khỏi bị thoái hóa.Tuy nhiên, nó không hiệu quả đối với RNase 1, RNase T1, S1 Nuclease, RNase H hoặc RNase từ Aspergillus.Chất ức chế RNase ở chuột đã được thử nghiệm bằng RT-PCR, RT-qPCR và IVT mRNA và tương thích với nhiều loại enzyme phiên mã ngược, DNA polymerase và RNA polymerase thương mại khác nhau.
So với các chất ức chế RNase ở người, chất ức chế RNase ở chuột không chứa hai cystein rất nhạy cảm với quá trình oxy hóa gây bất hoạt chất ức chế.Điều đó làm cho nó ổn định ở nồng độ DTT thấp (dưới 1 mM).Tính năng này làm cho nó phù hợp để sử dụng trong các phản ứng có nồng độ DTT cao gây bất lợi cho phản ứng (ví dụ RT-PCR thời gian thực).
Asự ứng dụng
Sản phẩm này có thể được sử dụng rộng rãi trong bất kỳ thí nghiệm nào có thể can thiệp RNase để tránh sự phân hủy RNA, chẳng hạn như:
1. Tổng hợp cDNA chuỗi đầu tiên, RT-PCR, RT-qPCR, v.v.;
2. Bảo vệ RNA khỏi sự thoái hóa trong quá trình sao chép/dịch mã trong ống nghiệm (ví dụ: sự nhân lên của virus trong ống nghiệm);
3.Ức chế hoạt động RNase trong quá trình phân lập và tinh chế RNA.
Điều kiện bảo quản
Bảo quản ở -25～-15oC;
Chu kỳ đông-tan 5 lần;
Có giá trị trong 1 năm.
định nghĩa đơn vị
Một đơn vị được định nghĩa là lượng Chất ức chế RNase cần thiết để ức chế 50% hoạt động của 5 ng RNase A.
Trọng lượng phân tử
Chất ức chế RNase (không chứa Glycerol) là protein 50 kDa.
Kiểm soát chất lượng
Exonuclease Hoạt động:
Việc ủ 40 U enzyme với 1 μg DNA tiêu hóa λ-Hind III trong 16 giờ ở 37°C dẫn đến không phát hiện được sự phân hủy DNA như được xác định bằng phương pháp điện di trên gel.
Hoạt động của Endonuclease:
Việc ủ 40 U enzyme với 1 μg λ DNA trong 16 giờ ở 37°C dẫn đến không phát hiện được sự phân hủy DNA như được xác định bằng phương pháp điện di trên gel.
biệt danh Hoạt động:
Việc ủ 40 U enzyme với 1 μg pBR322 trong 16 giờ ở 37oC dẫn đến sự phân hủy DNA không thể phát hiện được như được xác định bằng phương pháp điện di trên gel.
RNase Hoạt động:
Việc ủ 40 U enzyme với 1,6 μg MS2 RNA trong 4 giờ ở 37oC dẫn đến không phát hiện được sự phân hủy RNA như được xác định bằng phương pháp điện di trên gel.
E.coli ADN:
40 U Enzyme được TaqMan qPCR phát hiện.DNA của E.coli là ≤ 0,1pg/40U.
Notes
1. Không lắc hoặc khuấy mạnh để tránh làm mất hoạt tính của enzym.
Chất ức chế 2.RNase hoạt động ở nhiệt độ từ 25oC đến 55oC và bị bất hoạt ở ≥65oC.
3. Hoạt động của RNase H, RNase 1 và RNase T1 không bị ức chế.
4. Phạm vi pH để ức chế hoạt động RNase rộng (hoạt động ở pH 5-9), cho thấy hoạt động tối đa ở pH 7-8.
