Enzyme UDG/UNG
UDG (uracil DNA glycosylase) có thể xúc tác quá trình thủy phân liên kết N-glycosid giữa bazơ uracil và xương sống đường phốt phát trong ssDNA và DSDNA.Nó có thể dễ dàng kiểm soát ô nhiễm khí dung và phù hợp với các hệ thống sinh học phân tử phổ biến như PCR, qPCR, RT-qPCR và LAMP.
Thông số kỹ thuật
| Máy chủ biểu thức | E. coli tái tổ hợp với gen uracil DNA glycosylase |
| Trọng lượng phân tử | 24. 8kDa |
| độ tinh khiết | ≥95% (TRANG SDS) |
| Bất hoạt nhiệt | 95oC, 5 ~ 10 phút |
| Định nghĩa đơn vị | Một đơn vị (U) được định nghĩa là lượng enzyme cần thiết để xúc tác quá trình thủy phân l μg dsDNA chứa dU trong 30 phút ở 25oC. |
Kho
Sản phẩm nên được bảo quản ở nhiệt độ -25oC ~ -15oC trong hai năm.
Hướng dẫn
1.Chuẩn bị hỗn hợp phản ứng PCR theo hệ thống sau
| Các thành phần | Khối lượng (μL) | Nồng độ cuối cùng |
| Bộ đệm PCR 10×(Mg²+Plus) | 5 | 1× |
| 25 mmol/LMgCl | 3 | 1,5 mmol/L |
| dUTP(10 mmol/L) | 3 | 0,6 mmol/L |
| dCTP/dGTP/dATP/dTTP(10mmol/Leach) | 1 | 0,2 mmol/Lọc |
| DNA mẫu | X | - |
| Sơn lót1 (10μmol/L) | 2 | 0,4 mol/L |
| Sơn lót 2 (10μmol/L) | 2 | 0,4 mol/L |
| Taq DNA Polymerase (5 U/μL) | 0,5 | 0,05 U/μL |
| Uracil DNA Glycosylase (UDG/UNG), 1 U/μL | 1 | 1 U/μL |
| ddH₂O | Lên đến 50 | - |
Ghi chú: Theo yêu cầu thí nghiệm, nồng độ cuối cùng của dUTP có thể được điều chỉnh trong khoảng 0,2-0,6 mmol/L và có thể thêm 0,2 mmol/L dTTP một cách có chọn lọc.
2.Thủ tục khuếch đại
| Bước chu kỳ | Nhiệt độ | Thời gian | Chu kỳ |
| Suy thoái mẫu chứa dU | 25oC | 10 phút | 1 |
| Kích hoạt UDG, biến tính ban đầu mẫu | 95oC | 5 ~ 10 phút | 1 |
| Biến tính | 95oC | 10 giây |
30-35 |
| Ủ | 60oC | 20 giây | |
| Sự mở rộng | 72oC | 30 giây/kb | |
| Phần mở rộng cuối cùng | 72oC | 5 phút | 1 |
Ghi chú: Thời gian phản ứng ở 25°C có thể được điều chỉnh trong vòng 5-10 phút tùy theo yêu cầu thực nghiệm.
Ghi chú
1.UDG hoạt động trong hầu hết các bộ đệm phản ứng PCR.
2.Nên bảo quản enzyme trong hộp đá hoặc trên bồn nước đá khi sử dụng và nên bảo quản ở nhiệt độ -20°C ngay sau khi sử dụng.
3.Vui lòng mặc PPE cần thiết, chẳng hạn như áo khoác và găng tay phòng thí nghiệm, để đảm bảo sức khỏe và sự an toàn của bạn!
