RT-LAMP Colormetric Master Mix HCB5204A
Sản phẩm này chứa chất đệm phản ứng, Hỗn hợp enzyme RT (Bst DNA polymerase và enzyme sao chép ngược chịu nhiệt), chất bảo vệ đông khô và các thành phần thuốc nhuộm tạo màu.Để sử dụng, chỉ cần sử dụng Buffer, enzyme phản ứng và mồi được trộn đều và thêm vào mẫu;thêm chất bảo vệ đông khô có thể được thẳng.Nó được kết nối với máy đông khô và được đông khô, đồng thời chỉ thêm mồi và mẫu khi sử dụng.Bộ sản phẩm này cung cấp khả năng phát hiện khuếch đại nhanh, rõ ràng bằng hình ảnh, phản ứng âm tính được biểu thị bằng màu đỏ và phản ứng dương tính được biểu thị bằng sự thay đổi sang màu vàng.
Thành phần
| Thành phần | HCB5204A-01 | HCB5204A-02 | HCB5204A-03 |
| Bộ đệm khuếch đại qua trung gian vòng lặp (có thuốc nhuộm) | 0,96mL | 4,80mL×2 | 9,60mL×10 |
| Hỗn hợp enzyme RT | 270 µL | 2,70mL | 2,70mL×10 |
| Chất bảo vệ đông khô | 0,96 mL × 2 | 9,60mL×2 | 9,60mL×20 |
Các ứng dụng
Để khuếch đại đẳng nhiệt DNA hoặc RNA.
Điều kiện bảo quản
Vận chuyển bằng đá khô, bảo quản ở -25~ -15oC.Tránh rã đông thường xuyên, sản phẩm có giá trị trong 12 tháng.
Giao thức
1.Làm tan dung dịch đệm phản ứng sẽ được sử dụng ở nhiệt độ phòng.Lắc nhanh hoặc đảo ngược ống vài lần để trộn kỹ, sau đó ly tâm để thu chất lỏng xuống đáy ống.
2.Chuẩn bị hệ thống phản ứng.Thuốc thử này có thể được điều chế trong hai hệ thống phản ứng, hỗn hợp phản ứng lỏng và hỗn hợp hệ thống đông khô.
1) Chuẩn bị hỗn hợp phản ứng lỏng
| Thành phần | Âm lượng |
| Bộ đệm khuếch đại qua trung gian vòng lặp (có thuốc nhuộm) | 10 µL |
| Hỗn hợp enzyme RT | 2,8 µL |
| Hỗn hợp sơn lót 10 ×a | 5 µL |
| Mẫu DNA/RNA b | × µL |
| Nước không có Nuclease | Lên đến 50 µL |
2) Hỗn hợp hệ thống đông khô
① Chuẩn bị hỗn hợp đông khô
| Thành phần | Âm lượng |
| Bộ đệm khuếch đại qua trung gian vòng lặp (có thuốc nhuộm) | 10 µL |
| Chất bảo vệ đông khô | 20 µL |
| Hỗn hợp enzyme RT | 2,8 µL |
| Nước không có Nuclease | Lên đến 50 µL |
② Đông khô: Hỗn hợp đã chuẩn bị được đông khô trong hệ thống 50μL
③ Chuẩn bị hỗn hợp phản ứng
| Thành phần | Âm lượng |
| Hỗn hợp đông khô | 1 miếng |
| Hỗn hợp sơn lót 10 ×a | 5 µL |
| Mẫu DNA/RNA b | × µL |
| Nước không có Nuclease | Lên đến 50 µL |
Ghi chú:
1) a.Hỗn hợp sơn lót 10×: 16 μM FIP/BIP, 2 μM F3/B3, 4 μM Loop F/B;
2) b.DEPC (tan trong nước) được khuyên dùng cho nhiệt độ axit nucleic.
1.Ủ ở 65°C trong 30-45 phút, có thể kéo dài thời gian thích hợp tùy theo sự thay đổi màu sắc của thời gian phản ứng.
2.Theo mắt thường, màu vàng là dương và màu đỏ là âm.
Ghi chú
1.Muối có thể xuất hiện ở đáy ống đệm, xoáy nhanh hoặc đảo ngược ống vài lần để trộn kỹ ở nhiệt độ phòng.
2.Nhiệt độ phản ứng có thể được tối ưu hóa trong khoảng từ 62oC đến 68oC tùy theo điều kiện của mồi.
3.Thuốc thử đã đóng gói không được để ngoài không khí trong thời gian dài.
4.Phản ứng đổi màu đỏ và vàng phụ thuộc vào sự thay đổi độ pH của hệ thống phản ứng, vui lòng không sử dụng dung dịch lưu trữ axit nucleic Tris có chứa Tris, nên sử dụng ddH2O axit nucleic được lưu trữ;
5.Thí nghiệm phải được tiêu chuẩn hóa, bao gồm chuẩn bị hệ thống phản ứng, đông khô, xử lý mẫu và thêm mẫu;
6.Để tránh ô nhiễm, nên chuẩn bị hệ thống phản ứng trong một băng ghế siêu sạch, hoặc thêm các mẫu vào tủ hút của phòng để tránh nhiễu dương giả.
