DNA Polymerase Bst 2.0 (không chứa Glycerol)
Bst DNA polymerase V2 có nguồn gốc từ Bacillus stearothermophilus DNA Polymerase I, có hoạt tính DNA polymerase 5′→3′ và hoạt động thay thế chuỗi mạnh, nhưng không có hoạt động exonuclease 5′→3′.Bst DNA Polymerase V2 lý tưởng cho việc dịch chuyển sợi, khuếch đại đẳng nhiệt LAMP (Khuếch đại đẳng nhiệt qua trung gian vòng lặp) và giải trình tự nhanh.
Các thành phần
| Thành phần | HC5005A-01 | HC5005A-02 | HC5005A-03 |
| BstDNApolymerase V2(Không chứa Glycerol)(8U/μL) | 0,2mL | 1mL | 10mL |
| Bộ đệm 10×HC Bst V2 | 1,5mL | 2 × 1,5mL | 3×10mL |
| MgSO4(100mM) | 1,5mL | 2 × 1,5mL | 2×10mL |
Các ứng dụng
1.LAMP khuếch đại đẳng nhiệt
2. Phản ứng dịch chuyển đơn sợi DNA
3. Giải trình tự gen GC cao
4. Trình tự DNA ở cấp độ nanogram.
Điều kiện lưu trữ
Vận chuyển dưới 0°C và bảo quản ở -25°C~-15°C.
Định nghĩa đơn vị
Một đơn vị được định nghĩa là lượng enzyme kết hợp 25nmol dNTP vào vật liệu không hòa tan trong axit trong 30 phút ở 65°C.
Kiểm soát chất lượng
1.Xét nghiệm độ tinh khiết protein (SDS-PAGE):Độ tinh khiết của Bst DNA polymerase V2 được xác định ≥99% bằng phân tích SDS-PAGE sử dụng phương pháp phát hiện Coomassie Blue.
2.Hoạt động exonuclease:Việc ủ phản ứng 50 μL chứa tối thiểu 8 U Bst DNA polymerase V2 với 1 μg λ -Hind Ⅲ DNA tiêu hóa trong 16 giờ ở 37 oC dẫn đến không phát hiện được sự suy thoái như đã xác định.
3.Hoạt động của biệt danh:Việc ủ phản ứng 50 μL chứa tối thiểu 8 U Bst DNA polymerase V2 với 1 μg pBR322 DNA trong 16 giờ ở 37°C sẽ không dẫn đến sự suy giảm có thể phát hiện được như đã xác định.
4.Hoạt động RNase:Việc ủ phản ứng 50 µL chứa tối thiểu 8 U Bst DNA polymerase V2 với 1,6 µg MS2 RNA trong 16 giờ ở 37°C sẽ không dẫn đến sự suy giảm có thể phát hiện được như đã xác định.
5.DNA của E. coli:120 U của Bst DNA polymerase V2 được sàng lọc để phát hiện sự hiện diện của DNA bộ gen của E. coli bằng cách sử dụng TaqMan qPCR với các đoạn mồi dành riêng cho locus E. coli 16S rRNA.Mức độ ô nhiễm DNA bộ gen của E. coli là 1 Bản sao.
Phản ứng ĐÈN
| Các thành phần | 25μL |
| Bộ đệm 10×HC Bst V2 | 2,5 µL |
| MgSO4 (100mM) | 1,5 µL |
| dNTP (mỗi loại 10mM) | 3,5 µL |
| SYTO™ 16 Xanh (25×)a | 1,0 µL |
| Hỗn hợp sơn lótb | 6 µL |
| Bst DNA Polymerase V2 (Không chứa Glycerol) (8 U/uL) | 1 µL |
| Bản mẫu | × µL |
| ddH₂O | Lên đến 25 µL |
Ghi chú:
1) a.SYTOTM 16 Green (25×): Tùy theo nhu cầu thực nghiệm, có thể sử dụng các loại thuốc nhuộm khác thay thế;
2) b.Hỗn hợp mồi: thu được bằng cách trộn 20 µM FIP, 20 µM BIP, 2,5 µM F3, 2,5 µM B3, 5 µM LF, 5 µ M LB và các thể tích khác.
Phản ứng và tình trạng
Bộ đệm 1 × HC Bst V2, nhiệt độ ủ nằm trong khoảng từ 60°C đến 65°C.
Bất hoạt nhiệt
80°C,20 phút
