2×HiF Taq cộng với Bản phối chính
Mã số: HCR2014B
HIF Taq plus Master Mix (Với thuốc nhuộm) là dung dịch trộn sẵn 2× sử dụng ngay có chứa Plus HIF DNA Polymerase, dNTP và bộ đệm được tối ưu hóa.Hai kháng thể đơn dòng ở nhiệt độ phòng có tác dụng ức chế hoạt động polymerase và hoạt động 3′→5′exonuclease được thêm vào hỗn hợp chính để thực hiện Hot Start PCR có độ đặc hiệu cao và dễ dàng.Hệ số mở rộng được thêm vào hỗn hợp chính để tạo cho enzyme khả năng khuếch đại đoạn dài, độ dài khuếch đại có thể lên tới 13 kb, enzyme có hoạt tính DNA polymerase 5′→3′ và 3′→5′ Hoạt động exonuclease, độ trung thực của nó gấp 83 lần so với Taq DNA polymerase, gấp 9 lần so với DNA polymerase thông thường.Nó phù hợp để khuếch đại các mẫu phức tạp, sản phẩm khuếch đại là một đầu cùn.
2×HIF Taq plus Master Mix (Với thuốc nhuộm) có ưu điểm là nhanh và dễ dàng, độ nhạy cao, độ đặc hiệu mạnh, độ ổn định tốt, v.v., hệ thống phản ứng chỉ cần thêm mồi và mẫu và có thể được khuếch đại bằng hai- giao thức từng bước, đơn giản hóa các bước thử nghiệm và tiết kiệm thời gian.Sản phẩm này chứa thuốc nhuộm chỉ thị điện di và sản phẩm PCR có thể được sử dụng trực tiếp để điện di.Ngoài ra, sản phẩm còn chứa chất bảo vệ cụ thể để hỗn hợp gốc có thể duy trì hoạt động ổn định sau nhiều lần đóng băng-tan băng.
Điều kiện bảo quản
Sản phẩm nên được bảo quản ở -25~-15oC trong 1 năm.
Thông số kỹ thuật
| Đặc điểm kỹ thuật sản phẩm | Bản phối chính |
| Sự tập trung | 2× |
| Bắt đầu nóng | Khởi động nóng tích hợp |
| nhô ra | cùn |
| Tốc độ phản ứng | Nhanh |
| Kích thước (Sản phẩm cuối cùng) | Lên tới 13kb |
| Điều kiện vận chuyển | Đá khô |
| Loại sản phẩm | Hỗn hợp PCR có độ chính xác cao |
Hướng dẫn
1.Hệ thống phản ứng PCR
| Các thành phần | Khối lượng (μL) |
| Mẫu ADN | Thích hợp |
| Sơn lót chuyển tiếp (10 μmol/L) | 2,5 |
| Sơn lót ngược (10 μmol/L) | 2,5 |
| 2×HIF Taq cộng với Hỗn hợp chính | 25 |
| ddH2O | đến 50 |
2.Khuyến nghị sử dụng các mẫu khác nhau
| Loại mẫu | Khuếch đại các đoạn từ 1kb đến 10 kb |
| DNA bộ gen | 50ng-200 ng |
| Plasmid hoặc DNA virus | 10pg-20ng |
| cDNA | 1-2,5 µL (Không vượt quá 10% thể tích phản ứng PCR cuối cùng) |
3.Giao thức khuếch đại
1) Giao thức hai bước (mẫu phức tạp)
| Bước chu kỳ | Nhiệt độ. | Thời gian | Chu kỳ |
| Biến tính ban đầu | 98oC | 3 phút | 1 |
| Biến tính | 98oC | 10 giây | 30-35 |
| Sự mở rộng | 68oC | 30 giây/kb | |
| Phần mở rộng cuối cùng | 72oC | 5 phút | 1 |
2) Giao thức ba bước (giao thức thông thường)
| Bước chu kỳ | Nhiệt độ. | Thời gian | Chu kỳ |
| Biến tính ban đầu | 98oC | 3 phút | 1 |
| Biến tính | 98oC | 10 giây | 30-35 |
| Ủ | 60oC | 20 giây | |
| Sự mở rộng | 72oC | 30 giây/kb | |
| Phần mở rộng cuối cùng | 72oC | 5 phút | 1 |
3) Giao thức ủ gradient (mẫu phức tạp)
| Bước chu kỳ | Nhiệt độ | Thời gian | Chu kỳ |
| Biến tính ban đầu | 98oC | 3 phút | 1 |
| Biến tính | 98oC | 10 giây | 15 (Giảm 1oC mỗi chu kỳ) |
| Ủ gradient | 70-55oC | 20 giây | |
| Sự mở rộng | 72oC | 30 giây/kb | |
| Biến tính | 98oC | 10 giây |
20 |
| Ủ | 55oC | 20 giây | |
| Sự mở rộng | 72oC | 30 giây/kb | |
| Phần mở rộng cuối cùng | 72oC | 5 phút | 1 |
Các tính năng theo giao thức khuếch đại khác nhau
| Giao thứcl | Hai bước | Ba bước | Ủ gradient |
| Thông số kỹ thuật. | nhanh | trung bình | chậm |
| Tính đặc hiệu | cao | trung bình | cao |
| hiệu suất PCR | trung bình | cao | trung bình |
| Tỷ lệ phát hiện | cao | trung bình | cao |
Ghi chú
Vui lòng mặc PPE cần thiết, chẳng hạn như áo khoác và găng tay phòng thí nghiệm, để đảm bảo sức khỏe và sự an toàn của bạn!
