Hỗn hợp sẵn xanh một bước RT-qPCR SYBR
Mã số: HCB5140A
One Step RT-qPCR Syber Green Premix dùng để định lượng huỳnh quang dựa trên thuốc nhuộm SYBR Green I.Sử dụng các mồi dành riêng cho gen, các phản ứng sao chép ngược và qPCR được hoàn thành trong một ống, loại bỏ nhu cầu mở nắp và vận hành pipet lặp đi lặp lại, cải thiện đáng kể hiệu quả xét nghiệm và giảm nguy cơ ô nhiễm.Đối với các mẫu RNA, bộ sản phẩm sử dụng Reverse Transcriptase chịu nhiệt để tổng hợp cDNA hiệu quả và HotStart Taq DNA Polymerase để khuếch đại định lượng.Trong hệ thống đệm được tối ưu hóa, độ nhạy của bộ sản phẩm có thể lên tới 0,1 pg đối với các mục tiêu có biểu hiện cao và cao tới 1 pg đối với các mục tiêu có biểu hiện vừa phải.Bộ kit này phù hợp cho việc khuếch đại và định lượng mẫu DNA.Nó cho phép phát hiện và định lượng nhạy cảm axit nucleic từ các mẫu thực vật và động vật, tế bào và vi sinh vật khác nhau.
Các thành phần
| No | Tên | Âm lượng | Âm lượng |
| 1 | Bộ đệm nâng cao | 250 µL | 2×1,25mL |
| 2 | Hỗn hợp enzyme nâng cao | 20 µL | 200 µL |
| 3 | RNase miễn phí H2O | 250 µL | 2×1,25mL |
Điều kiện bảo quản
Sản phẩm này nên được bảo quản ở nhiệt độ -25~-15oC, tránh ánh sáng trong 1 năm.
Hướng dẫn
1.Cấu hình hệ thống phản ứngd
| Các thành phần | Khối lượng (μL) | Khối lượng (μL) | Nồng độ cuối cùng |
| Bộ đệm nâng cao | 12,5 | 25 | 1× |
| Hỗn hợp enzyme nâng cao | 1 | 2 | - |
| Sơn lót chuyển tiếp (10 μmol/L)a | 0,5 | 1 | 0,2 mol/L |
| Sơn lót ngược (10 μmol/L)a | 0,5 | 1 | 0,2 mol/L |
| Bản ghi RNAb | X | X | - |
| RNase miễn phí H2ồc | đến 25 | đến 50 | - |
Ghi chú:
1) a.TNồng độ mồi cuối cùng là 0,2 μmol/L, cũng có thể được điều chỉnh trong khoảng từ 0,1 đến 1μmol/L nếu thích hợp.
2) b.Thuốc thử cực kỳ nhạy cảm, với Tổng RNA nằm trong khoảng 1pg-1μg và thử nghiệm mẫu người cho thấy đầu vào tối ưu là 1 pg-100 ng, kiểm soát giá trị Ct tổng thể trong khoảng 15-30 nếu thích hợp.
3) c.Nên sử dụng 20μL hoặc 50μL để đảm bảo tính hợp lệ và khả năng tái tạo của quá trình khuếch đại gen mục tiêu.
4) d.Vui lòng chuẩn bị trên bàn siêu sạch và sử dụng các đầu tip và ống phản ứng không chứa cặn nuclease;lời khuyên với hộp mực lọc được khuyến khích.Tránh ô nhiễm chéo và ô nhiễm khí dung.
2.Chương trình phản ứng
| Bước chu kỳ | Nhiệt độ. | Thời gian | Chu kỳ |
| Phiên mã ngược | 50oCa | 6 phút | 1 |
| Biến tính ban đầu | 95oC | 5 phút | 1 |
| Phản ứng khuếch đại | 95oC | 15 giây | 40 |
| 60oCb | 30 giây | ||
| Giai đoạn đường cong nóng chảy | Mặc định của công cụ | 1 | |
Ghi chú:
1) a.Nhiệt độ sao chép ngược có thể được chọn trong khoảng 50-55°C tùy theo nhu cầu thí nghiệm.Đối với các mẫu DNA, quá trình sao chép ngược có thể được bỏ qua.
2) b.Trong trường hợp đặc biệt, nhiệt độ ủ/mở rộng có thể được điều chỉnh theo giá trị Tm của lớp sơn lót, khuyến nghị là 60°C.
Ghi chú
1. Sản phẩm này chỉ dành cho mục đích nghiên cứu.
2. Vui lòng sử dụng áo khoác phòng thí nghiệm và găng tay dùng một lần để đảm bảo an toàn cho bạn.
