Trộn sẵn đầu dò Multiplex qPCR
Mã số: HCB5051A
TaqMan multiplex qPCR Master Mix (Dye Based) là giải pháp tiền khuếch đại PCR định lượng thời gian thực 2 × được đặc trưng bởi độ nhạy và độ đặc hiệu cao, có màu xanh lam và có tác dụng thêm mẫu.Sản phẩm này là thuốc thử trộn sẵn 2× Mix cho phép thực hiện tối đa bốn phản ứng PCR định lượng huỳnh quang trong một giếng phản ứng.Sản phẩm này chứa phương pháp kháng thể biến đổi gen đối với enzyme Taq khởi động nóng, cải thiện đáng kể độ nhạy và độ đặc hiệu khuếch đại.Đồng thời, sản phẩm này đã tối ưu hóa sâu bộ đệm đa phản ứng, có thể cải thiện hiệu suất khuếch đại của phản ứng và phát huy khả năng khuếch đại hiệu quả của các mẫu có nồng độ thấp.Sản phẩm này có thể được sử dụng để phân tích định lượng kiểu gen và ghép kênh.
Sự chỉ rõ
| Bắt đầu nóng | Khởi động nóng tích hợp |
| Phương pháp phát hiện | Phát hiện đầu dò mồi |
| phương pháp PCR | qPCR |
| Polymerase | Taq DNA polymerase |
| Loại mẫu | ADN |
Điều kiện bảo quản
Sản phẩm được vận chuyển cùng với đá khô và có thể bảo quản ở nhiệt độ -25~-15oC trong 2 năm.
Hướng dẫn
1. Phản ứngHệ thống
| Các thành phần | Khối lượng (μL) | Nồng độ cuối cùng |
| 2× TaqMan ghép kênh qPCR Master Mix | 12,5 | 1× |
| Hỗn hợp mồi (10 μmol/L) a | × | 0,1 - 0,5 mol/L |
| Hỗn hợp đầu dò (10 μmol/L)b | × | 50 - 250nmol/L |
| Thuốc nhuộm tham chiếu Rox | 0,5 | 1× |
| DNA mẫu/cDNA | 1-10 | - |
| ddH2O | lên đến 25 | - |
Ghi chú:Trộn kỹ trước khi sử dụng để tránh tạo bọt quá mức do lắc mạnh.
Một.Nồng độ mồi: Primer Mix chứa nhiều cặp mồi, thường mỗi mồi có nồng độ cuối cùng là 0,2 μmol/L và cũng có thể được điều chỉnh trong khoảng 0,1 đến 0,5 μmol/L nếu thích hợp.
b.Nồng độ đầu dò: Hỗn hợp đầu dò chứa nhiều đầu dò với tín hiệu huỳnh quang khác nhau và nồng độ của mỗi đầu dò có thể được điều chỉnh trong khoảng từ 50 đến 250nmol/L tùy theo tình huống cụ thể.
1.Tham chiếu thuốc nhuộm Rox: Nó được sử dụng trên thiết bị khuếch đại PCR thời gian thực như Hệ thống sinh học ứng dụng để sửa lỗi tín hiệu huỳnh quang được tạo ra giữa các giếng;sản phẩm này không chứa tham chiếu thuốc nhuộm Rox.Cas#10200 được khuyến nghị nếu cần.
2.Pha loãng mẫu: qPCR có độ nhạy cao và nên pha loãng mẫu để sử dụng.Nếu mẫu là dung dịch gốc cDNA, thể tích mẫu không được vượt quá 1/10 tổng thể tích.
3.Hệ thống phản ứng: khuyến nghị 25μL, 30μL hoặc 50 μL để đảm bảo hiệu quả và độ lặp lại của quá trình khuếch đại gen mục tiêu.
4.Chuẩn bị hệ thống: Vui lòng chuẩn bị trên bàn siêu sạch, sử dụng các đầu và ống phản ứng không có cặn nuclease;nên sử dụng các mẹo với hộp lọc.Tránh ô nhiễm chéo và ô nhiễm khí dung.
2.Chương trình phản ứng
| Bước chu kỳ | Nhiệt độ. | Thời gian | Chu kỳ |
| Biến tính ban đầu | 95oC | 5 phút | 1 |
| Biến tính | 95oC | 15 giây | 45 |
| Ủ/Mở rộng | 60oC | 30 giây |
Ghi chú:
1.Ủ/Mở rộng: Nhiệt độ và thời gian có thể được điều chỉnh phù hợp theo giá trị Tm của lớp sơn lót được thiết kế.
2.Thu tín hiệu huỳnh quang: Thời gian thu tín hiệu huỳnh quang cần thiết cho các thiết bị phát hiện qPCR khác nhau là khác nhau, vui lòng đặt theo giới hạn thời gian tối thiểu.Thời gian của một số nhạc cụ phổ biến được thiết lập như sau:
20 giây: Hệ sinh học ứng dụng 7700, 7900HT, 7500 Fast
31 giây: Hệ sinh học ứng dụng 7300
32 giây: Hệ sinh học ứng dụng 7500
Ghi chú
Vui lòng mặc PPE cần thiết, chẳng hạn như áo khoác và găng tay phòng thí nghiệm, để đảm bảo sức khỏe và sự an toàn của bạn!
