BspQI
BspQI có thể được biểu hiện tái tổ hợp trong E. coli có thể nhận biết các vị trí cụ thể và được sản xuất theo
BspQI, một endnuclease hạn chế endonuclease giới hạn IIs, có nguồn gốc từ chủng E. coli tái tổ hợp mang gen BspQI được nhân bản và biến đổi từ Bacillus sphaericus.Nó có thể nhận ra các trang web cụ thể và trình tự nhận dạng cũng như các trang web phân tách như sau:
5' · · · ·GTCCTTC(N) · · · · · · · · · ·3'
3' · · · · CGAGAAG(NNNN) · · · · 5'
Tính năng sản phẩm
1. Hoạt động cao, tiêu hóa nhanh;
2. Hoạt độ sao thấp, đảm bảo cắt chính xác như “dao mổ”;
3. Không có BSA và không có nguồn gốc động vật;
Độ nhạy methyl hóa
Dđang methyl hóa:Không nhạy cảm;
Dcm methyl hóa:Không nhạy cảm;
Quá trình methyl hóa CpG:Không nhạy cảm;
Điều kiện bảo quản
Sản phẩm phải được vận chuyển ≤ 0oC;Bảo quản ở điều kiện -25~- 15oC.
Bộ đệm lưu trữ
20mM Tris-HCl, 0,1mM EDTA, 500 mM KCl, 1,0 mM dithiothreitol, 500 µg/ml Albumin tái tổ hợp, 0,1% Trition X-100 và 50% glycerol (pH 7,0 @ 25°C).
Định nghĩa đơn vị
Một đơn vị được định nghĩa là lượng enzyme cần thiết để tiêu hóa 1µg DNA Nội kiểm trong 1 giờ ở 50°C trong tổng thể tích phản ứng là 50 µL.
Kiểm soát chất lượng
Xét nghiệm độ tinh khiết protein (SDS-PAGE):Độ tinh khiết của BspQI được xác định ≥95% bằng phân tích SDS-PAGE.
RNase:10U BspQI với 1,6μg MS2 RNA trong 4 giờ ở 50oC không mang lại sự phân hủy như được xác định bằng phương pháp điện di trên gel agarose.
Hoạt động DNase không cụ thể:10U BspQI với 1μg λ DNA ở 50oC trong 16 giờ, so với 50oC trong 1 giờ, không tạo ra lượng DNA dư thừa như được xác định bằng phương pháp điện di trên gel agarose.
Thắt và cắt bỏ:Sau khi tiêu hóa 1 μg λDNA với 10U BspQI, các đoạn DNA có thể được nối với T4 DNA ligase ở 16°C.Và những đoạn dây nối này có thể được cắt lại bằng BspQI.
E coli ADN: Phát hiện TaqMan qPCR đặc hiệu của E. coli 16s rDNA cho thấy dư lượng bộ gen của E.coli ≤ 0,1pg/ul.
Dư lượng protein chủ:50 trang/phút
vi khuẩn Nội độc tố: Thử nghiệm LAL, theo Phiên bản Dược điển Trung Quốc IV 2020, phương pháp thử nghiệm giới hạn gel, quy tắc chung (1143).Hàm lượng nội độc tố vi khuẩn phải ≤10 EU/mg.
Hệ thống phản ứng và điều kiện
| Thành phần | Âm lượng |
| BspQ I(10 U/μL) | 1 µL |
| ADN | 1 g |
| Bộ đệm 10 x BspQ I | 5 µL |
| đ H2O | Lên đến 50 µL |
Điều kiện phản ứng: 50oC, 1 ~ 16 giờ.
Bất hoạt nhiệt: 80°C trong 20 phút.
Hệ thống và điều kiện phản ứng được đề xuất có thể mang lại hiệu quả tiêu hóa enzyme tương đối tốt, chỉ mang tính tham khảo, vui lòng tham khảo kết quả thí nghiệm để biết chi tiết.
Ứng dụng sản phẩm
Hạn chế tiêu hóa endnuclease, nhân bản nhanh.
Ghi chú
1. Thể tích enzyme ≤ 1/10 thể tích phản ứng.
2. Hoạt động của ngôi sao có thể xảy ra khi nồng độ glycerol lớn hơn 5%.
3. Hoạt động phân cắt có thể xảy ra khi Chất nền dưới tỷ lệ khuyến nghị.
