DNase I
DNase I (Deoxyribonuclease I) là một endodeoxyribonuclease có thể tiêu hóa DNA sợi đơn hoặc sợi đôi.Nó nhận biết và tách các liên kết phosphodiester để tạo ra monodeoxynucleotide hoặc oligodeoxynucleotide chuỗi đơn hoặc đôi với các nhóm photphat ở đầu 5′ và hydroxyl ở đầu 3′.Hoạt động của DNase I phụ thuộc vào Ca2+ và có thể được kích hoạt bởi các ion kim loại hóa trị hai như Mn2+ và Zn2+.5mM Ca2+ bảo vệ enzyme khỏi bị thủy phân.Với sự hiện diện của Mg2+, enzyme có thể ngẫu nhiên nhận biết và phân cắt bất kỳ vị trí nào trên bất kỳ chuỗi DNA nào.Với sự có mặt của Mn2+, các chuỗi kép DNA có thể được nhận biết và phân cắt đồng thời ở hầu hết cùng một vị trí để tạo thành các đoạn DNA đầu phẳng hoặc các đoạn DNA đầu dính có 1-2 nucleotide nhô ra.
Thuộc tính sản phẩm
Bovine Pancreas DNase I được biểu hiện trong hệ thống biểu hiện nấm men và được tinh chế.
Cthành phần
| Thành phần | Âm lượng | |||
| 0,1KU | 1KU | 5KU | 50KU | |
| DNase I, không có RNase | 20μL | 200μL | 1mL | 10mL |
| Bộ đệm 10×DNase I | 1mL | 1mL | 5 × 1mL | 5 × 10mL |
Vận chuyển và lưu trữ
1. Độ ổn định khi lưu trữ: – 15oC~-25oC để lưu trữ;
2. Ổn định vận chuyển: Vận chuyển dưới túi nước đá;
3. Cung cấp: 10 mM Tris-HCl, 2 mM CaCl2, 50% glycerol, pH 7,6 ở 25oC.
Định nghĩa đơn vị
Một đơn vị được định nghĩa là lượng enzyme sẽ phân hủy hoàn toàn 1 µg DNA pBR322 trong 10 phút ở 37°C.
Kiểm soát chất lượng
RNase:5U DNase I với 1,6 μg MS2 RNA trong 4 giờ ở 37oC không mang lại sự phân hủy như được xác định bằng phương pháp điện di trên gel agarose.
vi khuẩn Nội độc tố:Thử nghiệm LAL, theo Phiên bản Dược điển Trung Quốc IV 2020, phương pháp thử nghiệm giới hạn gel, quy tắc chung (1143).Hàm lượng nội độc tố vi khuẩn phải ≤10 EU/mg.
Hướng dẫn sử dụng
1. Chuẩn bị dung dịch phản ứng trong ống không có RNase theo các tỷ lệ được liệt kê dưới đây:
| Thành phần | Âm lượng |
| ARN | X g |
| Bộ đệm 10 × DNase I | 1 µL |
| DNase I, không có RNase(5U/μL) | 1 U trên mỗi μg RNA |
| ddH2O | Lên đến 10 µL |
2,37oC trong 15 phút;
3.Thêm bộ đệm kết thúc để dừng phản ứng và đun nóng ở 65oC trong 10 phút để làm bất hoạt DNase I. Mẫu có thể được sử dụng trực tiếp cho thí nghiệm phiên mã tiếp theo.
Ghi chú
1.Sử dụng 1U DNase I cho mỗi μg RNA hoặc 1U DNase I cho ít hơn 1μg RNA.
2.EDTA nên được thêm vào nồng độ cuối cùng là 5 mM để bảo vệ RNA khỏi bị phân hủy trong quá trình khử hoạt tính enzyme.
