Bộ ELISA CHO HCP
Phương pháp ELISA hấp thụ miễn dịch một bước được sử dụng trong xét nghiệm này.Các mẫu chứa CHOK1 HCP đồng thời phản ứng với kháng thể kháng CHOK1 của dê đánh dấu HRP và kháng thể kháng CHOK1 được phủ trên tấm ELISA, cuối cùng tạo thành phức hợp bắt cặp gồm kháng thể pha rắn-kháng thể đánh dấu HCP.Kháng nguyên-kháng thể không liên kết có thể được loại bỏ bằng cách rửa đĩa ELISA.Chất nền TMB được thêm vào giếng để có đủ phản ứng.Quá trình phát triển màu sẽ dừng lại sau khi thêm dung dịch dừng và giá trị OD hoặc độ hấp thụ của dung dịch phản ứng ở bước sóng 450/650nm được đọc bằng đầu đọc vi bản.Giá trị OD hoặc giá trị độ hấp thụ tỷ lệ thuận với hàm lượng HCP trong dung dịch.Từ đó có thể tính được nồng độ HCP trong dung dịch theo đường chuẩn.
Ứng dụng
Bộ này được sử dụng để phát hiện định lượng hàm lượng dư lượng protein tế bào chủ CHOK1 trong các mẫu.
Cthành phần
| Có/không | Thành phần | Sự tập trung | Điều kiện bảo quản |
| 1 | Tiêu chuẩn HCP CHOK1 | 0,5 mg/mL | 20oC |
| 2 | Thuốc kháng CHO HCP-HRP | 0,5 mg/mL | ≤–20oC, tránh ánh sáng |
| 3 | TMB | NA | 2-8oC, tránh ánh sáng |
| 4 | 20 × PBST 0,05% | NA | 2-8oC |
| 5 | Dừng giải pháp | NA | RT |
| 6 | Máy hàn vi tấm | NA | RT |
| 7 | BSA | NA | 2-8oC |
| 8 | Tấm phủ trước hấp phụ cao | NA | 2-8oC |
Thiết bị cần thiết
| Vật tư tiêu hao/Thiết bị | Sản xuất | Mục lục |
| Đầu đọc microplate | Thiết bị phân tử | Spectra Max M5, M5e hoặc tương đương |
| Máy trộn nhiệt | Eppendorf | Eppendorf/5355, hoặc tương đương |
| Máy trộn vortex | IKA | MS3 Digital hoặc tương đương |
Lưu trữ và ổn định
1.Vận chuyển ở -25~-15°C.
2.Điều kiện bảo quản như trong Bảng 1;các thành phần 1-2 được lưu trữ ≤–20°C,5-6 được lưu trữ RT,3、4、7、8 được bảo quản ở 2-8oC;thời hạn hiệu lực là 12 tháng.
Thông số sản phẩm
1.Độ nhạy: 1ng/mL
2.Phạm vi phát hiện: 3- 100ng/mL
3.Độ chính xác: CV giữa các lần phân tích 10%, CV giữa các lần phân tích 15%
4.Độ phủ HCP: >80%
5.Tính đặc hiệu: Bộ sản phẩm này rất phổ biến vì nó phản ứng đặc biệt với CHOK1 HCP, không phụ thuộc vào quá trình tinh chế.
Chuẩn bị thuốc thử
1.PBST 0,05%
Lấy 15 ml dung dịch 20×PBST 0,05%, pha loãng trong ddH2O, và định mức đến 300 ml.
2.1,0% BSA
Lấy 1g BSA trong chai pha loãng với 100 ml PBST 0,05%, trộn đều cho đến khi tan hoàn toàn và bảo quản ở 2-8°C.Dung dịch đệm pha loãng đã chuẩn bị có hiệu lực trong 7 ngày.Nên chuẩn bị khi cần thiết.
3.Dung dịch phát hiện 2μg/mL
Lấy 48μL 0,5 mg/mL Anti-CHO HCP-HRP và pha loãng trong 11.952μL 1% BSA để thu được nồng độ cuối cùng là dung dịch phát hiện 2μg/mL.
4.QC và chuẩn bị các tiêu chuẩn CHOK1 HCP
| Ống KHÔNG. | Nguyên bản | Sự tập trung | Âm lượng | 1%BSA | tổng khối lượng | Cuối cùng |
| A | Tiêu chuẩn | 0,5 mg/mL | 10 | 490 | 500 | 10.000 |
| B | A | 10.000 | 50 | 450 | 500 | 1.000 |
| S1 | B | 1.000 | 50 | 450 | 500 | 100 |
| S2 | S1 | 100 | 300 | 100 | 400 | 75 |
| S3 | S2 | 75 | 200 | 175 | 375 | 40 |
| S4 | S3 | 40 | 150 | 350 | 500 | 12 |
| S5 | S4 | 12 | 200 | 200 | 400 | 6 |
| S6 | S5 | 6 | 200 | 200 | 400 | 3 |
| NC | NA | NA | NA | 200 | 200 | 0 |
| QC | S1 | 100 | 50 | 200 | 250 | 20 |
Bảng: Chuẩn bị QC và Tiêu chuẩn
Quy trình khảo nghiệm
1.Chuẩn bị thuốc thử như được chỉ ra trong phần “Chuẩn bị thuốc thử” ở trên.
2.Lấy 50μL chất chuẩn, mẫu và QC (tham khảo Bảng 3) vào từng giếng, sau đó thêm 100μL dung dịch Phát hiện (2μg/mL);Đậy tấm bằng chất bịt kín và đặt tấm ELISA lên máy trộn nhiệt.Ủ ở tốc độ 500 vòng/phút, 25±3oC trong 2 giờ.
3.Đảo ngược tấm vi mô vào bồn rửa và loại bỏ dung dịch phủ.Hút 300μL PBST 0,05% vào mỗi giếng để rửa đĩa ELISA và loại bỏ dung dịch, rửa lại 3 lần.Lật ngược đĩa lên khăn giấy sạch và lau khô.
4.Thêm 100μL chất nền TMB (xem Bảng 1) vào mỗi giếng, đậy kín đĩa ELISA và ủ trong bóng tối ở 25±3oC trong 15 phút.
5.Hút 100μL dung dịch dừng vào mỗi giếng.
6.Đo độ hấp thụ ở bước sóng 450/650nm bằng đầu đọc vi bản.
7.Phân tích dữ liệu bằng SoftMax hoặc phần mềm tương đương.Vẽ đường cong chuẩn bằng cách sử dụng mô hình hồi quy logistic bốn tham số.
Ví dụ về đường cong chuẩn
LƯU Ý: Nếu nồng độ HCP trong mẫu vượt quá giới hạn trên của đường chuẩn thì cần phải pha loãng đúng cách bằng dung dịch đệm pha loãng trước khi thử nghiệm.
LƯU Ý
Dung dịch dừng là axit sulfuric 2M, vui lòng xử lý cẩn thận để tránh bắn tung tóe!
